Validation d’une méthode de mesure de l’activité antiélastasique de l’alpha1-antitrypsine circulante humaine
Dechomet, Magali
Validation d’une méthode de mesure de l’activité antiélastasique de l’alpha1-antitrypsine circulante humaine - 2024.
76
The existence of alpha-1 antitrypsin variants with apparently unremarkable phenotypes and serum concentrations, contrasting with a clinical picture suggestive of a severe deficiency, led us to investigate whether in these cases there was a reduction or even suppression of the capacity of alpha-1 antitrypsin to inhibit elastase. To this end, in two different laboratories, we adapted and validated a method for measuring the functional activity of alpha-1 antitrypsin, based on spectrophotometric kinetic analysis of the inhibition by serum alpha-1 antitrypsin of the hydrolytic activity of porcine pancreatic elastase on a chromogenic substrate.This method has proved to be robust, reproducible and transferable and made possible to define, on the basis of an analysis of a hospital population, a functionality index with a confidence interval comprised between 0.87 and 1.2, allowing to identify subjects likely to have a functional deficiency of alpha-1 antitrypsin, whether this deficiency being of a genetic origin without any quantitative or phenotypic translation, or whether being acquired under the effect of external agents (cigarette smoke or viruses). L’existence de variants d’alpha-1 antitrypsine à phénotype et concentration sérique apparemment sans particularités contrastant avec un tableau clinique évocateur de l’existence d’un déficit sévère nous a conduits à rechercher dans ces cas de figure une diminution voire une suppression de la capacité de l’alpha-1 antitrypsine à inhiber l’élastase. Pour ce faire et dans deux laboratoires différents, nous avons adapté et validé une méthode de mesure de l’activité fonctionnelle de l’alpha-1 antitrypsine dont le principe repose sur l’analyse spectrophotométrique cinétique de l’inhibition par l’alpha-1 antitrypsine sérique de l’activité hydrolytique de l’élastase pancréatique de porc sur un substrat chromogène.Cette méthode s’est avérée robuste, reproductible et transférable et a permis de définir à partir de l’analyse d’une population hospitalière, un index de fonctionnalité dont l’intervalle de confiance à 95 % compris entre 0,87 et 1,2 permet d’identifier les sujets susceptibles de présenter un déficit fonctionnel de l’alpha-1 antitrypsine, que ce déficit soit d’origine génétique mais sans traduction quantitative et phénotypique ou bien que ce déficit soit acquis sous l’effet d’agents extérieurs (fumée de cigarettes ou virus).
Validation d’une méthode de mesure de l’activité antiélastasique de l’alpha1-antitrypsine circulante humaine - 2024.
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The existence of alpha-1 antitrypsin variants with apparently unremarkable phenotypes and serum concentrations, contrasting with a clinical picture suggestive of a severe deficiency, led us to investigate whether in these cases there was a reduction or even suppression of the capacity of alpha-1 antitrypsin to inhibit elastase. To this end, in two different laboratories, we adapted and validated a method for measuring the functional activity of alpha-1 antitrypsin, based on spectrophotometric kinetic analysis of the inhibition by serum alpha-1 antitrypsin of the hydrolytic activity of porcine pancreatic elastase on a chromogenic substrate.This method has proved to be robust, reproducible and transferable and made possible to define, on the basis of an analysis of a hospital population, a functionality index with a confidence interval comprised between 0.87 and 1.2, allowing to identify subjects likely to have a functional deficiency of alpha-1 antitrypsin, whether this deficiency being of a genetic origin without any quantitative or phenotypic translation, or whether being acquired under the effect of external agents (cigarette smoke or viruses). L’existence de variants d’alpha-1 antitrypsine à phénotype et concentration sérique apparemment sans particularités contrastant avec un tableau clinique évocateur de l’existence d’un déficit sévère nous a conduits à rechercher dans ces cas de figure une diminution voire une suppression de la capacité de l’alpha-1 antitrypsine à inhiber l’élastase. Pour ce faire et dans deux laboratoires différents, nous avons adapté et validé une méthode de mesure de l’activité fonctionnelle de l’alpha-1 antitrypsine dont le principe repose sur l’analyse spectrophotométrique cinétique de l’inhibition par l’alpha-1 antitrypsine sérique de l’activité hydrolytique de l’élastase pancréatique de porc sur un substrat chromogène.Cette méthode s’est avérée robuste, reproductible et transférable et a permis de définir à partir de l’analyse d’une population hospitalière, un index de fonctionnalité dont l’intervalle de confiance à 95 % compris entre 0,87 et 1,2 permet d’identifier les sujets susceptibles de présenter un déficit fonctionnel de l’alpha-1 antitrypsine, que ce déficit soit d’origine génétique mais sans traduction quantitative et phénotypique ou bien que ce déficit soit acquis sous l’effet d’agents extérieurs (fumée de cigarettes ou virus).
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